厄瓜多尔利什曼原虫基因分析:能否区别巴拿马利什受原虫和圭亚那利什受原虫的分类群[英」/Banuls A

    在厄瓜多尔，利什曼病临床症状除皮肤型和粘膜皮肤型外，还有许多临床表现，这种临床症状的多样性被认为是由于利什曼原虫虫种的多样性造成的。现已知厄瓜多尔有7种利什曼原虫，其中最常见的种是巴拿马利什曼原虫[L . ( v .) ]Panamensis」和圭亚那利什曼原虫[L . ( v .) ]guleznensis ]，按世界卫生组织分类法将其归类为圭亚那复合体(guyanensis complex )。基因和生化分析说明:两者遗传学上关系非常紧密，只有一种酶系统能作为诊断标记将两者分开。

    根据地理位置和该病的流行特征，作者收集了35份样本，其中28份来自有症状的病人，2份来自树獭,1份来自大，4份来自白岭。作者对所有样本进行巧种酶系统的同工酶电泳，分析16个已被公认的不同位点，两个不同的位点用酶解物为次黄贰的核昔酸氢化酶(NHI)系统区分(Nhi1和Nhi2 );对厄瓜多尔地区的16份样本，用随机扩增多态DNA( RAPD)指纹法进一步分析;根据同工酶电泳图及与对照的比较，确定每一份样品的种类;对虫株间的遗传关系，根据多位点酶电泳(MLEE)和RAPD提供的数据计算Jaccarc距离，进行配对比较;同时，根据获得的基质距离，用非加权算术均数成对法(UP-GMA)绘制树状图;利用不同基因位点的连锁不平衡或基因型的非随机结合来研究该地区利什曼原虫的群体结构。

    结果，检测的35份样本中，26份被认为是巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫;2份鉴定为巴西利什曼原虫，从树獭中分离的2份，具有特殊的基因型，不同于已知的任何利什曼虫种;;5份具有复合的同工酶基因位点，认为是巴西利什曼原虫和圭亚那利什曼原虫的杂种。由此说明厄瓜多尔利什曼原虫的基因多样性，但主要是圭亚那利什曼原虫和巴拿马利什曼原虫。这26份巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫分别分离自人、犬和白岭。6一磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)位点曾被认为是巴拿马利什曼原虫区别于圭亚那利什曼原虫的标记，但在样本虫株的酶电泳图中，呈现多样性的等位基因;相反，Nhi 2位点电泳时只出现2种不同的带形。所有的圭亚那利什曼原虫对照株只呈现一个强酶活性的等位基因，而巴拿马利什曼原虫对照株却出现弱的或无效基因，样本虫株电泳明显呈现其中一种或同时出现的两种情况。根据UPGMA树状图，将同工酶亚群分成4簇。第一簇包括所有鉴定为巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫的虫株，和巴拿马利什曼原虫、圭亚那利什曼原虫参考样品;第二簇只包括从Zumba地区的5份样品，即圭亚那利什曼原虫和巴拿马利什曼原虫的杂种;第三簇包括巴西利什曼原虫参考样品和2份样本中的巴西利什曼原虫;第四簇包括厄瓜多尔利什曼原虫和L.(V). colombiensis参考样品和2份从树獭中分离的具有特殊基因型的样品。根据MLEE,UPGMA树状图，没有发现明确的分别存在于巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫的结构，故不可能对第一簇作进一步分类;通过RAPD分析，也没有发现特异性的巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫的RAPD片段。由于MLEE和RAPD不能表明巴拿马利什曼原虫和圭亚那利什曼原虫符合独立单源品系，因而基因分析怀疑这是两个独立种。种群基因分析显示，支持巴拿马利什曼原虫或圭亚那利什曼原虫基本上是克隆群结构的假设。